CRP基因原核表达载体的构建和表达及其免疫原性检测
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篇1：CRP基因原核表达载体的构建和表达及其免疫原性检测
CRP基因原核表达载体的构建和表达及其免疫原性检测
采用大肠杆菌表达体系来获得C-反应蛋白(CRP)融合蛋白.以pDNR-CRP质粒为模板,用PCR方法扩增获得全长的.CRP基因,将其克隆入表达载体pET28a(+)中,再转化到宿主菌BL21(DE3)中,加入IPTG诱导表达,表达产物做SDS-PAGE电泳分析,最后做免疫原性检测.成功地构建了CRP基因原核表达载体pET28a(+)-CRP,经IPTG诱导SDS-PAGE电泳分析表明C-反应蛋白能在大肠杆菌中获得表达,但免疫原性检测初步结果为阴性.结果证明CRP能以融合蛋白的形式在宿主菌BL21(DE3)中得到大量表达,表达产物缺乏免疫原性,其机理还有待进一步试验探讨.
作 者：余云芳 姚伟 张昌菊 鲁林 何正权 乐超银 梁宏伟 YU Yun-fang YAO Wei ZHANG Chang-ju LU Lin HE Zheng-quan YUE Chao-yin LIANG Hong-wei 作者单位：余云芳,YU Yun-fang(三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;三峡大学医学院,宜昌,443002)姚伟,YAO Wei(三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;福建农林大学,农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室,福州,350002)
张昌菊,ZHANG Chang-ju(三峡大学医学院,宜昌,443002)
鲁林,何正权,乐超银,梁宏伟,LU Lin,HE Zheng-quan,YUE Chao-yin,LIANG Hong-wei(三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002)
刊 名：江西农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS JIANGXIENSIS(NATURAL SCIENCES EDITION) 年，卷(期)： 28(2) 分类号：Q786 关键词：C反应蛋白 原核表达 IPTG 免疫原性篇2：麻疯树毒蛋白curcin2基因的两个原核表达载体的构建和表达
麻疯树毒蛋白curcin2基因的两个原核表达载体的构建和表达
从麻疯树基因组中扩增到毒蛋白curcin2基因成熟肽编码区,成功构建了原核表达载体pET-C和pQE-C,并转化大肠杆菌获得转化子PCB和PCM.在不同温度、不同浓度IPTG和不同诱导时间下,PCB都没有curcin2重组蛋白产生,而PCM能表达出curcin2,主要以包涵体形式存在.诱导温度较低时,延长诱导时间有可溶性的curcin2产生.在文章的`实验中,PCM表达curcin2的优化条件为:温度16℃,IPTG 1 mmol・L-1,时间16～24h.
作 者：邓骛远 罗通 徐莺 张颖 陈放 罗言云 DENG Wu-Yuan LUO Tong XU Ying ZHANG Ying CHEN Fang LUO Yan-Yun 作者单位：四川大学生命科学学院,成都,610064 刊 名：植物生理学通讯 ISTIC PKU英文刊名：PLANT PHYSIOLOGY COMMUNICATIONS 年，卷(期)：2006 42(2) 分类号：Q94 关键词：麻疯树 毒蛋白 原核表达 核唐体失活蛋白篇3：人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
目的: 构建人CIDE-3基因的原核表达载体, 并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法: 提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA, 经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段, 并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中, 构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3.经限制性内切酶BamH I、 Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21(DE3), 经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果: 获得全长为516 bp的人CIDE-3基因片段.以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coli BL21(DE3)后, 经IPTG诱导, 表达出相对分子质量(Mr)约为23 000的重组CIDE-3蛋白.SDS-PAGE分析显示, 表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的'胞质中, 表达量约占全菌蛋白的32%.结论: 成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3, 并表达出重组CIDE-3蛋白, 为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础.
作 者：姚丽 李青 李蓬 张静 叶菁 陈广生 王淑芳 YAO Li LI Qing LI Peng ZHANG Jing YE Jing CHEN Guang-sheng WANG Shu-fang 作者单位：姚丽,李青,张静,叶菁,陈广生,王淑芳,YAO Li,LI Qing,ZHANG Jing,YE Jing,CHEN Guang-sheng,WANG Shu-fang(第四军医大学西京医院病理科,陕西,西安,710032)李蓬,LI Peng(香港科技大学生物系,香港)
刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q786 关键词：CIDE-3 基因克隆 原核表达篇4：鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达
鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达
根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定.目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因,与GenBank上的AF198100(FPVUS)和AJ581527(FP9)序列进行序列比较分析表明:3种病毒株的`ORF073基因与鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)和英国弱毒株(FP9)完全一致.克隆的ORF073基因与原核表达载体pET-28a构建重组表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)细菌中表达了分子质量约32 ku的蛋白.
作 者：王彦红 马怀良 胡顺林 仇旭升 刘秀梵 WANG Yan-hong MA Huai-liang HU Shun-ling QIU Xu-shen LIU Xiu-fan 作者单位：扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009 刊 名：扬州大学学报（农业与生命科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF YANGZHOU UNIVERSITY(AGRICULTURAL AND LIFE SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 27(4) 分类号：Q786 S852.65+9.1 关键词：鸡痘病毒 ORF073 基因克隆 原核表达篇5：大肠杆菌glgC基因的克隆及原核表达
大肠杆菌glgC基因的克隆及原核表达
以大肠杆菌BL21染色体DNA为模板,根据glgC基因的全序列设计了1对引物,在优化的.PCR反应条件下扩增出了glgC基因片段,测序结果显示该片段大小为1 296 bp,编码432个氨基酸残基.将该基因克隆到原核表达载体pET-28a-c(+)中,重组载体pET-glgC转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定,得到了与理论推算的glgC基因表达产物分子质量(约53 kD)相符的特异蛋白条带.
作 者：贾笑英 张金文 王蒂 JIA Xiao-ying ZHANG Jin-wen WANG Di 作者单位：贾笑英,JIA Xiao-ying(甘肃农业大学,农学院,兰州,730070)张金文,王蒂,ZHANG Jin-wen,WANG Di(甘肃农业大学,农学院,兰州,730070;甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,兰州,730070)
刊 名：西北植物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA 年，卷(期)： 26(4) 分类号：Q785 Q786 关键词：glgC基因 克隆 原核表达 载体构建篇6：鸡survivin重组腺病毒载体的构建和体外表达
鸡survivin重组腺病毒载体的构建和体外表达
根据GenBank中鸡survivin cDNA序列,设计引物,从鸡胚组织提取总RNA,利用RT-PCR扩增鸡survivin全长cDNA,经T-A克隆后插入腺病毒穿梭载体、骨架载体,构建腺病毒重组质粒,转染293E4pIX细胞,构建鸡survivin重组腺病毒.T-A克隆的'测序结果与GenBank中鸡survivin cDNA完全一致.限制性内切酶分析和PCR表明腺病毒质粒携带survivin基因,Western blot证实重组腺病毒正确表达survivin,survivin基因已被成功重组到腺病毒基因组.
作 者：李秋 田聆 文艳君 吴扬 罗彦 LI Qiu TIAN Ling WEN Yan-jun WU Yang LUO Yan 作者单位：四川大学华西医院人类疾病生物治疗重点实验室・肿瘤生物治疗科,成都,610041 刊 名：四川大学学报(自然科学版) ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 43(5) 分类号：Q95 关键词：survivin 异种疫苗 腺病毒载体篇7：口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建
口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建
通过RT-PCR方法获得了口蹄疫病毒O型,编号为OF3毒的P1+2A区的'目的基因,并将其克隆到克隆载体pMD18-T上,再根据表达载体pQE-Trisystem的特性及酶切位点设计合适的表达引物.由表达引物通过PCR技术从克隆载体上扩增出带有特定酶切位点的目的片段,再对载体和目的片段进行酶切处理,处理后由T4 DNA连接酶将二者连接.通过PCR及酶切鉴定,结果证明口蹄疫病毒目的基因片段已被正确克隆到表达载体pQE-Trisystem上.
作 者：龚真莉 刘湘涛 刘磊 尚佑军 尹双辉 田宏 郑海学 陈国栋 GONG Zhen-li LIU Xiang-tao LIU Lei SHANG You-jun YIN Shuang-hui TIAN Hong ZHENG Hai-xue CHEN Guo-dong 作者单位：龚真莉,GONG Zhen-li(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃,兰州,730046)刘湘涛,尚佑军,尹双辉,田宏,郑海学,陈国栋,LIU Xiang-tao,SHANG You-jun,YIN Shuang-hui,TIAN Hong,ZHENG Hai-xue,CHEN Guo-dong(中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃,兰州,730046)
刘磊,LIU Lei(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070)
刊 名：甘肃农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 41(1) 分类号：Q785 关键词：口蹄疫病毒 P1+2A基因 pQE-Trisystem篇8：小鼠IL-5真核表达质粒的构建和体外表达
小鼠IL-5真核表达质粒的构建和体外表达
目的 构建小鼠白细胞介素-5(IL-5)基因真核表达质粒,了解该质粒在真核细胞COS细胞中有效表达情况.方法 以含有小鼠IL-5基因的克隆质粒pORF9-mIL-5为模板,通过PCR扩增小鼠IL-5全段基因,应用基因工程技术将扩增的`基因片段插入peDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-m IL-5,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染COS细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质.结果 成功扩增了小鼠IL-5全长基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-m IL-5,Westem blot方法证实该质粒能在COS真核细胞中有效表达小鼠IL-5目的蛋白.结论 成功构建了小鼠IL-5基因的真核表达质粒载体,为进一步研究IL-5的新功能和免疫基因治疗奠定了基础.
作 者：谭光宏 王才春 黄风迎 王华 黄用豪 林映莹 宿静梅 作者单位：谭光宏,黄风迎,王华,黄用豪,林映莹,宿静梅(海南医学院海南省热带病重点实验室,海南海口571101)王才春(海南医学院海南省热带病重点实验室,海南海口571101;海南医学院附属医院呼吸内科,海南海口570102)
刊 名：中国热带医学 ISTIC英文刊名：CHINA TROPICAL MEDICINE 年，卷(期)：2007 7(8) 分类号：Q753 关键词：白细胞介素-5 真核表达 质粒 基因工程【CRP基因原核表达载体的构建和表达及其免疫原性检测】相关文章：
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