重组幽门螺杆菌AhpC基因的克隆表达及其初步纯化
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篇1：重组幽门螺杆菌AhpC基因的克隆表达及其初步纯化
重组幽门螺杆菌AhpC基因的克隆表达及其初步纯化
目的克隆表达幽门螺杆菌(helicobacter pylori)AhpC基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌的疫苗保护性抗原奠定基础.方法用PCR方法从临床分离株9806的`染色体DNA中扩增出AhpC基因片段,将目的基因插入表达载体pET-11c中,重组载体pET-AhpC经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.采用阴离子交换层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 PCR扩增的AhpC基因长度为597bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因片段与GenBank公布的序列相似性达98%,SDS-PAGE显示,经IPTG诱导目的蛋白占总蛋白的28.7%,经纯化后,蛋白纯度达70%以上.Western blot检测该蛋白与兔抗Hp的多克隆抗血清发生结合反应.结论成功构建了AhpC表达载体pET-AhpC,并在大肠杆菌中高效表达.
作 者：张卫军 邹全明 毛旭虎 罗萍 解庆华 作者单位：第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038 刊 名：重庆医学 ISTIC PKU英文刊名：CHONGQING MEDICINE 年，卷(期)： 35(11) 分类号：Q78 关键词：幽门螺杆菌 AhpC基因 克隆篇2：幽门螺杆菌ureB基因的草莓转化研究
幽门螺杆菌ureB基因的草莓转化研究
建立了农杆菌介导利用潮霉素抗性作为筛选标记的草莓转化系统.以草莓叶片为材料,把Helicobacter pylori的ureB基因连接到CaMV35S启动子后构成pCAMBIA13011-ureB表达载体,通过根癌农杆菌EHA105介导叶盘法转化草莓,经共培养和潮霉素抗性筛选,得到60株抗性植株.对所得植株进行PCR检测,表明阳性苗比例为42%.RT-PCR结果进一步证明目的基因在T0代转化植株中已经转录.
作 者：顾青 朱睦元 GU Qing ZHU Mu-yuan 作者单位：顾青,GU Qing(浙江工商大学,生物工程系,浙江,杭州,310035;浙江大学,生命科学学院,浙江,杭州,310012)朱睦元,ZHU Mu-yuan(浙江大学,生命科学学院,浙江,杭州,310012)
刊 名：浙江农业学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS 年，卷(期)：2006 18(3) 分类号：Q785 S668 关键词：草莓 幽门螺杆菌 ureB基因 农杆菌介导篇3：牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化
牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化
从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T SimpleVector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化.经测序,构建的`克隆质粒pMD-MPT83与GenBank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamH Ⅰ+HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Westernblotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带.表明MPT83基因原核表达载体构建成功.
作 者：鲁俊鹏 罗满林 宋延华 邹潍力 LU Jun-peng LUO Man-lin SONG Yan-hua ZOU Wei-li 作者单位：鲁俊鹏,罗满林,邹潍力,LU Jun-peng,LUO Man-lin,ZOU Wei-li(华南农业大学,兽医学院,广东,广州,510642)宋延华,SONG Yan-hua(广东温氏食品集团有限公司,广东,新兴,527439)
刊 名：中国兽医科学 ISTIC PKU英文刊名：VETERINARY SCIENCE IN CHINA 年，卷(期)： 36(5) 分类号：S852.618 Q786 关键词：牛分支杆菌 MPT83基因 克隆 原核表达 蛋白纯化篇4：幽门螺杆菌HP0762蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备
幽门螺杆菌HP0762蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备
目的:表达和纯化幽门螺杆菌HP0762蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体.方法:从幽门螺杆菌SS1中经PCR扩增得到了hp0762基因,将其克隆至含有6xHis编码序列的原核表达载体pET-28a(+)中,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;用HiTrap Chelating HP亲和柱纯化重组蛋白,Western印迹进一步鉴定;以纯化后的蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔,制备该蛋白的`多克隆抗体;用EUSA和Western印迹检测抗血清.结果:目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度可达90%以上;制备了针对HP0762重组蛋白的抗血清,抗体ELISA效价为1:256 000,Western印迹分析表明该抗体能特异性识别内源性HP0762.结论:完成了HP0762蛋白的原核高效表达与纯化,并制备了其高效价的多克隆抗体,为进一步对其进行疫苗研制与基因功能研究奠定了基础.
作 者：李丛胜 邱炎 王艳春 韩秀萍 陶好霞 徐兴然 刘纯杰 LI Cong-Sheng QIU Yan WANG Yan-Chun HAN Xiu-Ping TAO Hao-Xia XU Xing-Ran LIU Chun-Jie 作者单位：李丛胜,LI Cong-Sheng(西南大学,药学院,重庆,400716;军事医学科学院,生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京,100071)邱炎,王艳春,韩秀萍,陶好霞,刘纯杰,QIU Yan,WANG Yan-Chun,HAN Xiu-Ping,TAO Hao-Xia,LIU Chun-Jie(军事医学科学院,生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京,100071)
徐兴然,XU Xing-Ran(西南大学,药学院,重庆,400716)
刊 名：生物技术通讯 ISTIC英文刊名：LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 21(2) 分类号：Q78 关键词：幽门螺杆菌 HP0762蛋白 原核表达 多克隆抗体篇5：鸡p15INK4B基因的克隆表达及纯化
鸡p15INK4B基因的克隆表达及纯化
为研究鸡p15INK4B蛋白的功能及为制备此蛋白的单克隆抗体提供材料,应用引物搭桥法合成p151NK4B基因,应用基因工程的手段构建p15INK4B基因的原核表达载体,在E.coli Rosetta(DE3)菌进行融合表达,并对表达产物进行亲和层析纯化.结果成功地构建了p15INK4B基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的`目的表达产物.
作 者：艾永兴 张玉静 胡薇 郝军元 邹亚学 张英波 Ai Yong-xing ZHANG Yu-jing HU Wei HAO Jun-yuan ZOU Ya-xue ZHANG Ying-bo 作者单位：艾永兴,张玉静,郝军元,邹亚学,张英波,Ai Yong-xing,ZHANG Yu-jing,HAO Jun-yuan,ZOU Ya-xue,ZHANG Ying-bo(吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062)胡薇,HU Wei(吉林农业大学生物技术学院,长春,130118)
刊 名：吉林农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF JILIN AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 28(4) 分类号：Q786 关键词：p15INK4B 细胞周期 原核表达 亲和层析篇6：金黄色葡萄球菌SPA基因的克隆、表达及纯化
金黄色葡萄球菌SPA基因的克隆、表达及纯化
目的: 构建携带Staphylococcal protein A (SPA)基因的原核表达载体, 诱导表达具有活性的'SPA.方法: 用PCR从金黄色葡萄球菌基因组中扩增SPA基因并克隆入pET32a(+)载体中, 在大肠杆菌BL21〈DE3〉中表达.表达产物经亲和层析进行纯化.结果: 所构建的原核表达载体为高效表达载体, 工程菌表达的SPA约占菌体总蛋白的40%, 经亲和层析纯化后获得SPA, 纯度达到99%.结论: 成功地建立了制备及纯化SPA的方法, 为SPA大量生产以及构建SPA融合表达体系奠定了基础.
作 者：徐军 吴凡 韩琳 吴鹏 张忠 作者单位：沈阳医学院中心实验室,辽宁,沈阳,110034 刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)：2006 22(6) 分类号：Q51 关键词：金黄色葡萄球菌蛋白A 基因 克隆 表达篇7：植物乳杆菌共轭亚油酸异构酶基因的克隆、序列分析及重组表达
植物乳杆菌共轭亚油酸异构酶基因的克隆、序列分析及重组表达
利用MRS培养基培养植物乳杆菌AS1.555,收集菌体后提取总DNA,用PCR技术扩增其亚油酸异构酶基因,克隆到pQE30质粒载体上,并进行测序.测序结果表明,扩增DNA全长1710 bp,编码569个氨基酸,分子量为64.7 ku.经同源性比较,此核酸序列与罗伊氏乳杆菌、短双歧杆菌、疮疱丙酸杆菌亚油酸异构酶基因核苷酸序列差别较大,推测此基因的.来源与上述菌种不同.
作 者：相丽新 曹健 王红军 尹艳丽 王育军 于海东 张琳 董理 XIANG Li-xin CAO Jian WANG Hong-jun YIN Yan-li WANG Yu-jun YU Hai-dong ZHANG Lin DONG Li 作者单位：河南工业大学生物工程学院,河南,郑州,450001 刊 名：化学与生物工程 ISTIC英文刊名：CHEMISTRY & BIOENGINEERING 年，卷(期)： 24(6) 分类号：Q78 关键词：植物乳杆菌 亚油酸异构酶基因 克隆 序列分析篇8：sTNFR Ⅱ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测
sTNFR Ⅱ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测
可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)和血管活性肠肽(VIP)对类风湿性关节炎(RA)均有治疗作用,但两者的作用机制不同.制备两者融合蛋白,可能具有更好的防治类风湿关节炎的`作用.用含有VIP基因序列的上游引物和sTNFRⅡ的下游引物,用PCR扩增出由连接序列将VIP和sTNFRⅡ基因连接的片段,再亚克隆到原核表达载体pET32a,在大肠杆菌DH5α内诱导表达.表达的产物经离子交换、疏水层析纯化,并用体外中和试验检测其抑制TNF细胞毒及肝细胞膜特异性脂蛋白(Lsp)诱导的细胞毒生物活性.结果显示构建的pET32a-VIP-sTNFRⅡ表达载体在大肠杆菌DH5α内以包涵体形式表达,疏水层析结合离子交换层析纯化后,融合蛋白具有较好的抑制炎症分子诱导的炎症反应生物活性,为将来应用打下基础.
作 者：王虹 曾位森 陈金华 王珊珊 刘丹 杨艳妮 陈百宏 李玲 WANG Hong ZENG Wei-sen CHEN Jin-hua WANG Shan-shan LIU Dan YANG Yan-ni CHEN Bai-hong Li Ling 作者单位：广州蓝星生物科技开发有限公司,广州,510663 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 26(5) 分类号：Q78 关键词：sTNFRⅡ VIP 融合蛋白 表达 纯化篇9：猴D型逆转录病毒P27基因的表达、纯化及重组蛋白的鉴定
猴D型逆转录病毒P27基因的表达、纯化及重组蛋白的鉴定
根据GenBank上已发表的.猴D型逆转录病毒SRV-2株基因组序列设计合成了一对特异性引物,通过PCR扩增出P27基因.将扩增出的片段克隆到原核表达载体pBAD/Thio-TOPO上,通过序列分析证实该片段与猴D型逆转录病毒SRV-2株P27基因序列一致,将阳性重组质粒转化至大肠杆菌TOPO10中,用阿拉伯糖诱导表达,表达的融合蛋白进行SDS-PAGE和WesternBlot分析,并用proBondTM柱在天然状态下进行纯化.结果表明,表达的融合蛋白分子量约为50KDa,其大小与预期相符.
作 者：程昀静 张利仙 段纲 艾军 龙云凤 董俊 严树发 周晓黎 CHENG Yun-Jing ZHANG Li-Xian DUAN Gang AI Jun LONG Yun-Feng DONG Jun YAN Shu-Fa ZHOU Xiao-Li 作者单位：程昀静,段纲,CHENG Yun-Jing,DUAN Gang(云南农业大学,动物科学技术学院,云南昆明,650201)张利仙,龙云凤,ZHANG Li-Xian,LONG Yun-Feng(昆明理工大学,云南昆明,650224)
艾军,董俊,严树发,周晓黎,AI Jun,DONG Jun,YAN Shu-Fa,ZHOU Xiao-Li(云南出入境检验检疫局,云南昆明,650228)
刊 名：中国动物检疫 PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANIMAL HEALTH INSPECTION 年，卷(期)：2010 “”(5) 分类号：S852.659.3 关键词：猴D型逆转录病毒 P27基因 表达 纯化【重组幽门螺杆菌AhpC基因的克隆表达及其初步纯化】相关文章：
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