人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
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篇1：人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
目的: 构建人CIDE-3基因的原核表达载体, 并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法: 提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA, 经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段, 并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中, 构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3.经限制性内切酶BamH I、Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21(DE3), 经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果: 获得全长为516 bp的人CIDE-3基因片段.以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coli BL21(DE3)后, 经IPTG诱导, 表达出相对分子质量(Mr)约为23 000的重组CIDE-3蛋白.SDS-PAGE分析显示, 表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的'胞质中, 表达量约占全菌蛋白的32%.结论: 成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3, 并表达出重组CIDE-3蛋白, 为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础.
作 者：姚丽 李青 李蓬 张静 叶菁 陈广生 王淑芳 YAO Li LI Qing LI Peng ZHANG Jing YE Jing CHEN Guang-sheng WANG Shu-fang 作者单位：姚丽,李青,张静,叶菁,陈广生,王淑芳,YAO Li,LI Qing,ZHANG Jing,YE Jing,CHEN Guang-sheng,WANG Shu-fang(第四军医大学西京医院病理科,陕西,西安,710032)李蓬,LI Peng(香港科技大学生物系,香港)
刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q786 关键词：CIDE-3 基因克隆 原核表达篇2：人细胞周期蛋白G2基因真核表达载体构建及其功能研究
人细胞周期蛋白G2基因真核表达载体构建及其功能研究
构建人cyclin G2基因真核表达载体,进一步研究cyclin G2对体外培养细胞增殖的调节作用及可能的.调节机制.以人口腔癌前上皮细胞系POE4总RNA的反转录产物为模板,应用RT-PCR方法克隆cyclin G2基因cDNA,成功构建了真核表达载体pIRES-G2.应用脂质体介导的基因转染技术,以体外培养的肿瘤细胞系HeLa细胞和正常细胞系CV-1细胞作为受体细胞,进行转基因表达研究,发现cyclin G2高表达对体外培养细胞的增殖起明显抑制作用.应用p16INK4a、p21WAF1、p27KIP1三种周期蛋白依赖性激酶抑制因子的单克隆抗体对转基因的HeLa细胞进行免疫细胞化学研究,发现转染pIRES-G2的实验组细胞中,p21WAF1蛋白染色阳性细胞数明显多于转染空载体的对照组,平均光密度值高于对照组,两组间均有显著性差异(p＜0.01),提示cyclin G2抑制细胞增殖作用可能是通过诱导p21WAF1的表达而实现.
作 者：田玉楼 刘洁 张学 TIAN Yu-lou LIU Jie ZHANG Xue 作者单位：田玉楼,TIAN Yu-lou(中国医科大学口腔医学院,沈阳,110002)刘洁,LIU Jie(中国医科大学实验技术中心,沈阳,110001)
张学,ZHANG Xue(中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室,沈阳,110001)
刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(6) 分类号：Q789 关键词：细胞周期蛋白G2 细胞增殖 p21WAF1篇3：水稻磷酸酯酶2A基因蛋白的原核表达载体构建、表达和纯化
水稻磷酸酯酶2A基因蛋白的原核表达载体构建、表达和纯化
利用PCR技术,从水稻品种日本晴幼穗cDNA中扩增磷酸酯酶2A的基因ORF片段,并将其克隆入原核表达载体pGEX-6p-1中构建重组质粒pGEX-6p-1-PP-2A,经限制性内切酶酶切鉴定以及测序结果表明成功构建了原核表达载体pGEX-6p-1-PP2A,转化E.coli JM109并通过终浓度为0.4mmol/L的IPTG诱导,表达出39kD的GST-PP2A融合蛋白,并用蛋白亲和层析柱GSTrap FF对表达产物进行纯化,为下一步的'研究打下了实验基础.
作 者：吴华 严定平罗越华 WU Hua YAN Ding-ping LUO Yue-hua 作者单位：海南大学农学院,海口,570228 刊 名：贵州科学 英文刊名：GUIZHOU SCIENCE 年，卷(期)： 27(2) 分类号：Q786 S511 关键词：磷酸酯酶2A 载体构建 重组蛋白 原核表达篇4：脉胞菌hH3v基因的初步研究及原核表达载体构建
脉胞菌hH3v基因的初步研究及原核表达载体构建
根据植物表达栽体pET52(b)多克隆住点和脉胞菌着丝粒结构相关蛋白CenH3的`编码基因hH3v序列,设计引物,通过PCR扩增将基因两端加上KpnⅠ和SacⅠ酶切住点,经双醇切后将hH3v插入表达载体pET52(b)中,利用热激法转化大肠杆菌Top10感受态细胞,在选择培养基上挑取单菌落培养,经PCR检测,表明目的基因原核表达载体构建成功,为着丝粒结构进一步的研究提供了基础.
作 者：王} 作者单位：牡丹江师范学院生物系,黑龙江,牡丹江,157012 刊 名：牡丹江师范学院学报（自然科学版） 英文刊名：JOURNAL OF MUDANJING NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES EDITION) 年，卷(期)：2009 “”(4) 分类号：Q74 关键词：脉胞菌 hH3v 表达载体 PCR篇5：IL15/PAP融合蛋白基因克隆及其原核与植物表达载体的构建
IL15/PAP融合蛋白基因克隆及其原核与植物表达载体的构建
将IL15和PAP基因通过一甘氨酸接头(Gly4Ser)3连接在一起,构建原核和植物表达载体,以期表达具有导向杀伤活性的融合蛋白.在引物设计中,通过引物在IL15基因下游引入(Gly4Ser)3的'编码序列和Bam HI位点,然后采取分步克隆及PCR、酶切、连接等一系列分子克隆方法,将IL15和PAP基因融合在一起,构建融合蛋白的原核与植物表达载体.经PCR和Nco Ⅰ/SalⅠ双酶切鉴定及测序,证实原核表达载体pET32a-IL15/PAP及植物表达载体pB-I P中均插入了正确的融合基因序列.
作 者： 作者单位： 刊 名：河南农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 40(3) 分类号：Q813.2 关键词：IL15/PAP融合蛋白 表达载体 构建篇6：麻疯树毒蛋白curcin2基因的两个原核表达载体的构建和表达
麻疯树毒蛋白curcin2基因的两个原核表达载体的构建和表达
从麻疯树基因组中扩增到毒蛋白curcin2基因成熟肽编码区,成功构建了原核表达载体pET-C和pQE-C,并转化大肠杆菌获得转化子PCB和PCM.在不同温度、不同浓度IPTG和不同诱导时间下,PCB都没有curcin2重组蛋白产生,而PCM能表达出curcin2,主要以包涵体形式存在.诱导温度较低时,延长诱导时间有可溶性的curcin2产生.在文章的`实验中,PCM表达curcin2的优化条件为:温度16℃,IPTG 1 mmol・L-1,时间16～24h.
作 者：邓骛远 罗通 徐莺 张颖 陈放 罗言云 DENG Wu-Yuan LUO Tong XU Ying ZHANG Ying CHEN Fang LUO Yan-Yun 作者单位：四川大学生命科学学院,成都,610064 刊 名：植物生理学通讯 ISTIC PKU英文刊名：PLANT PHYSIOLOGY COMMUNICATIONS 年，卷(期)：2006 42(2) 分类号：Q94 关键词：麻疯树 毒蛋白 原核表达 核唐体失活蛋白篇7：人朊蛋白基因的克隆与原核表达
人朊蛋白基因的克隆与原核表达
以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein, PrP)基因Prnp的.开放阅读框(ORF),与pMD-18T载体连接后转入E.coli JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99.6 %,推导的氨基酸序列同源性为99.8 %.将编码人成熟PrP的基因定向克隆到pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E.coli BL21(DE3),在37 ℃下用1.0 mmol/L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20 %～25 %.用Ni-NTA树脂亲和层析纯化了表达产物.Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别.因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原.
作 者：姜海霞 刘永生 杨孝朴 陈豪泰 朱小玲 张杰 谢庆阁 JIANG Hai-xia LIU Yong-sheng YANG Xiao-pu CHEN Hao-tai ZHU Xiao-ling ZHANG Jie XIE Qing-ge 作者单位：姜海霞,朱小玲,JIANG Hai-xia,ZHU Xiao-ling(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)刘永生,陈豪泰,张杰,谢庆阁,LIU Yong-sheng,CHEN Hao-tai,ZHANG Jie,XIE Qing-ge(中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)
杨孝朴,YANG Xiao-pu(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070)
刊 名：甘肃农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 41(3) 分类号：Q785 Q786 关键词：人 朊蛋白基因 克隆 原核表达篇8：人防御素-5基因的克隆和真核表达载体的构建
人防御素-5基因的克隆和真核表达载体的构建
目的 对人防御素5(HD-5)基因进行克隆,构建真核表达载体HD5-pPICZαA.方法 从人cDNA文库中PCR扩增HD-5基因片段,用EcoR I和Xba I分别双酶切HD-5基因扩增产物和毕赤酵母表达载体pPICZαA,用T4DNA连接酶连接目的 基因片段和pPICZαA,然后转化到E.coil Top10中,Zeocin筛选转化子并进行PCR、酶切和序列鉴定.结果 提取阳性克隆的重组质粒,EeoR I和xba I双酶切后跑电泳获得预期条带;同时重组质粒经序列测定,证实HD-5基因正确插入pPICZαA中,插入位置、方向均正确.结论 成功构建人防御素5基因的'真核表达载体HD5-pPICZαA,为HD-5蛋白的真核真核表达奠定基础.
作 者：陆航 李华 吴学敏 单颖 作者单位：陆航(辽宁医学院附属第一医院普外科,辽宁锦州,121000)李华(辽宁医学院附属第一医院肿瘤科,辽宁锦州,121000)
吴学敏,单颖(辽宁医学院免疫与病原生物学教研室,辽宁锦州,121000)
刊 名：解剖科学进展 ISTIC英文刊名：PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES 年，卷(期)： 16(3) 分类号：Q782 关键词：人防御素-5 克隆 表达载体 毕赤酵母篇9：CRP基因原核表达载体的构建和表达及其免疫原性检测
CRP基因原核表达载体的构建和表达及其免疫原性检测
采用大肠杆菌表达体系来获得C-反应蛋白(CRP)融合蛋白.以pDNR-CRP质粒为模板,用PCR方法扩增获得全长的.CRP基因,将其克隆入表达载体pET28a(+)中,再转化到宿主菌BL21(DE3)中,加入IPTG诱导表达,表达产物做SDS-PAGE电泳分析,最后做免疫原性检测.成功地构建了CRP基因原核表达载体pET28a(+)-CRP,经IPTG诱导SDS-PAGE电泳分析表明C-反应蛋白能在大肠杆菌中获得表达,但免疫原性检测初步结果为阴性.结果证明CRP能以融合蛋白的形式在宿主菌BL21(DE3)中得到大量表达,表达产物缺乏免疫原性,其机理还有待进一步试验探讨.
作 者：余云芳 姚伟 张昌菊 鲁林 何正权 乐超银 梁宏伟 YU Yun-fang YAO Wei ZHANG Chang-ju LU Lin HE Zheng-quan YUE Chao-yin LIANG Hong-wei 作者单位：余云芳,YU Yun-fang(三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;三峡大学医学院,宜昌,443002)姚伟,YAO Wei(三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;福建农林大学,农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室,福州,350002)
张昌菊,ZHANG Chang-ju(三峡大学医学院,宜昌,443002)
鲁林,何正权,乐超银,梁宏伟,LU Lin,HE Zheng-quan,YUE Chao-yin,LIANG Hong-wei(三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002)
刊 名：江西农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS JIANGXIENSIS(NATURAL SCIENCES EDITION) 年，卷(期)：2006 28(2) 分类号：Q786 关键词：C反应蛋白 原核表达 IPTG 免疫原性【人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达】相关文章：
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