长春花Crlea基因的克隆及原核表达初步分析
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篇1：长春花Crlea基因的克隆及原核表达初步分析
长春花Crlea基因的克隆及原核表达初步分析
晚期胚胎丰富(Late Embryogenesis Abundant, LEA)蛋白是植物在干旱胁迫下响应并被描述为具有潜在的抗旱功能的一类重要的抗旱蛋白.通过建立干旱胁迫下长春花(Catharanthus roseus)的cDNA文库并进行测序筛选分析,首次分离得到Crlea(Crlea for Catharanthus roseus late embryogenesis abundant)全长基因.该基因具有492 bp的开放读码框,编码163个氨基酸,其中偏性氨基酸含量占总蛋白的55.9%.同源性分析表明该假定蛋白与胡萝卜(Daucus carota)LEA DC3 的`同源性达69%.亲水性分析表明具有极强的亲水性.为进一步验证CrLEA蛋白的功能,构建了Crlea基因的原核表达载体并在大肠杆菌中对其表达进行了分析.结果表明,原核载体成功的表达了CrLEA蛋白,亲水性实验及热稳定性实验表明CrLEA蛋白具有极强的亲水性和热稳定性.
作 者：聂明珠 祖元刚 房思良 NIE Ming-Zhu ZU Yuan-Gang FANG Si-Liang 作者单位：东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室,哈尔滨,150040 刊 名：植物研究 ISTIC PKU英文刊名：BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH 年，卷(期)： 26(5) 分类号：Q94 关键词：长春花 LEA 基因克隆 原核表达 Catharanthus roseus LEA protein gene cloning prokaryotic expression篇2：鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达
鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达
根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定.目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因,与GenBank上的AF198100(FPVUS)和AJ581527(FP9)序列进行序列比较分析表明:3种病毒株的`ORF073基因与鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)和英国弱毒株(FP9)完全一致.克隆的ORF073基因与原核表达载体pET-28a构建重组表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)细菌中表达了分子质量约32 ku的蛋白.
作 者：王彦红 马怀良 胡顺林 仇旭升 刘秀梵 WANG Yan-hong MA Huai-liang HU Shun-ling QIU Xu-shen LIU Xiu-fan 作者单位：扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009 刊 名：扬州大学学报（农业与生命科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF YANGZHOU UNIVERSITY(AGRICULTURAL AND LIFE SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 27(4) 分类号：Q786 S852.65+9.1 关键词：鸡痘病毒 ORF073 基因克隆 原核表达篇3：大肠杆菌glgC基因的克隆及原核表达
大肠杆菌glgC基因的克隆及原核表达
以大肠杆菌BL21染色体DNA为模板,根据glgC基因的全序列设计了1对引物,在优化的.PCR反应条件下扩增出了glgC基因片段,测序结果显示该片段大小为1 296 bp,编码432个氨基酸残基.将该基因克隆到原核表达载体pET-28a-c(+)中,重组载体pET-glgC转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定,得到了与理论推算的glgC基因表达产物分子质量(约53 kD)相符的特异蛋白条带.
作 者：贾笑英 张金文 王蒂 JIA Xiao-ying ZHANG Jin-wen WANG Di 作者单位：贾笑英,JIA Xiao-ying(甘肃农业大学,农学院,兰州,730070)张金文,王蒂,ZHANG Jin-wen,WANG Di(甘肃农业大学,农学院,兰州,730070;甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,兰州,730070)
刊 名：西北植物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA 年，卷(期)： 26(4) 分类号：Q785 Q786 关键词：glgC基因 克隆 原核表达 载体构建篇4：斑茅SAMDC基因的克隆及其原核表达分析
斑茅SAMDC基因的克隆及其原核表达分析
以斑茅(Erianthus arundinaceus)samdc基因的.cDNA为基础,采用基因重组技术,将该基因按正确的阅读框架定向克隆于原核表达载体pET-29a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析.结果表明:重组斑茅samdc基因在大肠杆菌中获得高效表达,其分子量约为43.281kDa.斑茅samdc基因原核表达载体的成功构建和重组斑茅SAMDC蛋白在大肠杆菌中的高效表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
作 者：蔡秋华 张积森 刘文荣 饶进 翁笑艳 陈如凯 张木清 CAI Qiu-Hua ZHANG Ji-Sen LIU Wen-Rong RAO Jin WENG Xiao-Yan CHEN Ru-Kai ZHANG Mu-Qing 作者单位：蔡秋华,CAI Qiu-Hua(福建农林大学农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室,福建福州,350002;福建省农业科学院水稻研究所,农业部闽台农作物种质资源利用重点开放实验室,福建福州,350019)张积森,刘文荣,饶进,翁笑艳,陈如凯,张木清,ZHANG Ji-Sen,LIU Wen-Rong,RAO Jin,WENG Xiao-Yan,CHEN Ru-Kai,ZHANG Mu-Qing(福建农林大学农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室,福建福州,350002)
刊 名：福建稻麦科技 英文刊名：FUJIAN SCIENCE AND TECHNOLOGY OF RICE AND WHEAT 年，卷(期)： 27(1) 分类号：Q78 关键词：斑茅 samdc 表达载体构建 基因表达篇5：人朊蛋白基因的克隆与原核表达
人朊蛋白基因的克隆与原核表达
以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein, PrP)基因Prnp的.开放阅读框(ORF),与pMD-18T载体连接后转入E.coli JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99.6 %,推导的氨基酸序列同源性为99.8 %.将编码人成熟PrP的基因定向克隆到pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E.coli BL21(DE3),在37 ℃下用1.0 mmol/L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20 %～25 %.用Ni-NTA树脂亲和层析纯化了表达产物.Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别.因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原.
作 者：姜海霞 刘永生 杨孝朴 陈豪泰 朱小玲 张杰 谢庆阁 JIANG Hai-xia LIU Yong-sheng YANG Xiao-pu CHEN Hao-tai ZHU Xiao-ling ZHANG Jie XIE Qing-ge 作者单位：姜海霞,朱小玲,JIANG Hai-xia,ZHU Xiao-ling(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)刘永生,陈豪泰,张杰,谢庆阁,LIU Yong-sheng,CHEN Hao-tai,ZHANG Jie,XIE Qing-ge(中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)
杨孝朴,YANG Xiao-pu(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070)
刊 名：甘肃农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 41(3) 分类号：Q785 Q786 关键词：人 朊蛋白基因 克隆 原核表达篇6：α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达
α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达
根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段.经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析.结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%.经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的`带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性.表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28 μg/g.
作 者：胡延春 张乃生 邓俊良 左之才 廖玉辉 欧阳红生 HU Yan-Chun ZHANG Nai-Sheng DENG Jun-Liang ZUO Zhi-Cai LIAO Yu-Hui OUYANG Hong-Sheng 作者单位：胡延春,邓俊良,左之才,廖玉辉,HU Yan-Chun,DENG Jun-Liang,ZUO Zhi-Cai,LIAO Yu-Hui(四川农业大学动物科技学院,雅安,625014)张乃生,欧阳红生,ZHANG Nai-Sheng,OUYANG Hong-Sheng(吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062)
刊 名：遗传 ISTIC PKU英文刊名：HEREDITAS(BEIJING) 年，卷(期)：2006 28(4) 分类号：Q78 S852 关键词：α-银环蛇毒素 基因克隆 非融合原核表达 免疫原性 生物学活性篇7：人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
目的: 构建人CIDE-3基因的原核表达载体, 并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法: 提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA, 经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段, 并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中, 构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3.经限制性内切酶BamH I、 Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21(DE3), 经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果: 获得全长为516 bp的人CIDE-3基因片段.以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coli BL21(DE3)后, 经IPTG诱导, 表达出相对分子质量(Mr)约为23 000的重组CIDE-3蛋白.SDS-PAGE分析显示, 表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的'胞质中, 表达量约占全菌蛋白的32%.结论: 成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3, 并表达出重组CIDE-3蛋白, 为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础.
作 者：姚丽 李青 李蓬 张静 叶菁 陈广生 王淑芳 YAO Li LI Qing LI Peng ZHANG Jing YE Jing CHEN Guang-sheng WANG Shu-fang 作者单位：姚丽,李青,张静,叶菁,陈广生,王淑芳,YAO Li,LI Qing,ZHANG Jing,YE Jing,CHEN Guang-sheng,WANG Shu-fang(第四军医大学西京医院病理科,陕西,西安,710032)李蓬,LI Peng(香港科技大学生物系,香港)
刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q786 关键词：CIDE-3 基因克隆 原核表达篇8：哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达
哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达
根据哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列设计一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,从分离自患病大黄鱼的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一段约800 bp的序列.将其克隆到pGEM-Teasy载体,测序结果证明该序列是哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因.用PCR方法去除其信号肽序列,定向克隆到原核表达载体pGEX-4T-2构建重组表达质粒pGEX-4T-OmpK.IPTG诱导后能够在大肠杆菌BL21中高效表达分子量约为53kD的.GST-OmpK融合蛋白.用纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔获得了高效价的抗血清.Western-blotting分析表明,它与从哈维氏弧菌中提取的约27 kD的外膜蛋白能够发生特异反应,提示外膜蛋白OmpK可能是哈维氏弧菌的重要保护性抗原之一.
作 者：张崇文 于涟 毛芝娟 褚武英 钱荣华 ZHANG Chong-wen YU Lian MAO Zhi-juan CHU Wu-ying QIAN Rong-hua 作者单位：张崇文,毛芝娟,褚武英,钱荣华,ZHANG Chong-wen,MAO Zhi-juan,CHU Wu-ying,QIAN Rong-hua(浙江大学生物医学工程学院,浙江,杭州,310027;浙江大学动物预防医学研究所,浙江,杭州,310029)于涟,YU Lian(浙江大学动物预防医学研究所,浙江,杭州,310029)
刊 名：水产学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA 年，卷(期)：2006 30(1) 分类号：Q78 Q936 关键词：哈维氏弧菌 外膜蛋白 OmpK 原核表达篇9：拟南芥热激转录因子HSFA2基因克隆与原核表达
拟南芥热激转录因子HSFA2基因克隆与原核表达
为了进一步阐明HSFA2功能,现采用Trizol法分离拟南芥叶片总RNA,用RT-PCR方法得到拟南芥HSFA2基因,经过连接、转化和蛋白诱导对其进行了原核表达研究.结果表明:从拟南芥叶片中分离到了高质量的`总RNA,进而扩增到了目的基因,将其连入表达载体PGEX-KG,且转入大肠杆菌BL21中.不同温度条件下的诱导结果表明,16℃下蛋白诱导效果较好.采用这套系统,可以使AtHSFA2得以较好的表达.
作 者：王瑾瑜 任亚萍 作者单位：河南城建学院,城市规划与建筑系,河南,平顶,460440 刊 名：北方园艺 PKU英文刊名：NORTHERN HORTICULTURE 年，卷(期)：2010 “”(8) 分类号：S637.903.6 关键词：热激转录因子 基因克隆 原核表达【长春花Crlea基因的克隆及原核表达初步分析】相关文章：
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