截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定
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篇1：截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定
截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定
为构建HCV截短型ns5b△21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体.运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5b△21基因;克隆入原核表达载体pRSETA.将重组表达质粒pRSETA-ns5b△21转化B121大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的.NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5b△21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清.说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体.
作 者：田江红 徐志凯 雷迎峰 尹文 陈任安 汪桦 吕欣 杨敬 孙梦宁 姚敏 作者单位：第四军医大学基础部微生物学教研室,西安,710032 刊 名：科学技术与工程 ISTIC英文刊名：SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING 年，卷(期)： 10(4) 分类号：Q343.17 关键词：HCV NS5B RNA聚合酶 大肠杆菌 蛋白表达篇2：人IGF-1在大肠杆菌中的可溶表达和纯化
人IGF-1在大肠杆菌中的可溶表达和纯化
目的:在大肠杆菌中的`可溶表达和纯化人胰岛素样生长因子1(hIGF-1).方法:根据hIGF-1的氨基酸序列和大肠杆菌密码子偏爱性,利用重叠延伸PCR的方法合成hIGF-1 DNA序列,构建表达载体,在大肠杆菌Origami B(DE3)中与硫氧还蛋白Trx A融合表达,并通过盐析和镍柱亲合层析进行纯化.结果:SDS-PAGE分析显示,重组融合蛋白以可溶形式存在,分子量约为28 kDa,占上清总蛋白的50%以上.经盐析和镍柱亲合层析进行纯化,目标蛋白纯度可达到90%左右.结论:复合干扰素在大肠杆菌中的高效可溶表达.
作 者：张守涛 梁会娟 张芸 作者单位：张守涛(郑州大学生物工程系,河南郑州,450001)梁会娟,张芸(河南富邦药业有限公司,河南郑州,450001)
刊 名：生物技术 PKU英文刊名：BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2010 20(2) 分类号：Q819 Q786 关键词：人胰岛素样生长因子1 硫氧还蛋白 可溶表达 纯化 Higf-1 Trx A soluble expression purification篇3：基因重组大肠杆菌表达截短型pZP3β的发酵条件优化
基因重组大肠杆菌表达截短型pZP3β的发酵条件优化
目的:对已构建好的表达pZP3β蛋白(pZP130)工程菌的培养条件进行优化,通过在5 L罐中发酵和Ni柱纯化,以期获取较大量目的产物.方法:在摇瓶中改变不同的培养及诱导条件,比较工程菌的生长和目的蛋白的表达,优化发酵条件;并在5 L发酵罐中进行发酵,获得菌体,破碎后进行Ni柱纯化.结果:优化的发酵条件是:10%的接种量,加入2%甘油的`培养基培养菌体3 h后加入0.5 mmol/L IPTG,诱导4 h后收样.在5 L发酵罐中发酵,获得菌体量36g/L,经Ni柱纯化,获得蛋白粗制品33 mg/L发酵液.结论:截短型pZP3β蛋白可以在E coli中获得较高表达,并且可以通过发酵和Ni柱纯化得到较大量的蛋白,这有助于pZP的深入研究和应用.
作 者：谢秋玲 陈小佳 朱伟杰 赵振云 吴建虹 徐万祥 刘侃 李菁 Qiu-ling XIE Xiao-jia CHEN Wei-jie ZHU Zhen-yun ZHAO Jian-hong WU Wan-xiang XU Kan LIU Jing LI 作者单位：谢秋玲,吴建虹,刘侃,Qiu-ling XIE,Jian-hong WU,Kan LIU(暨南大学生物工程研究所,广州,510632)陈小佳,Xiao-jia CHEN(广东省生物工程药物重点实验室,广州,510632)
朱伟杰,Wei-jie ZHU(暨南大学生殖免疫研究中心,广州,510632)
赵振云,Zhen-yun ZHAO(暨南大学生物系,广州,510632)
徐万祥,Wan-xiang XU(上海市计划生育科学研究所,上海,32)
李菁,Jing LI(暨南大学医学院,广州,510632)
刊 名：生殖与避孕 ISTIC PKU英文刊名：REPRODUCTION AND CONTRACEPTION 年，卷(期)： 26(4) 分类号：Q819 关键词：截短型 猪卵透明带-3β 大肠杆菌 表达 发酵篇4：基因重组BDNF蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与功能鉴定
基因重组BDNF蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与功能鉴定
目的 构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,以获取高产量、低成本、高纯度且具有生物学活性的BDNF蛋白.方法 以人的全长BDNFcDNA为模板,用PCR方法扩增成熟区BDNF的cDNA,应用基因重组技术将人BDNF cDNA克隆到质粒pET-30a(+)中,进行限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS,经IPTG诱导表达后,用Ni-NTA亲和层析纯化获取蛋白,用SDS-PAGE和western blot方法鉴另,噻唑蓝(MTT)法检测重组蛋白对PC12细胞增殖的.影响. 结果 扩增出的人BDNF cDNA片段克隆进了原核表达载体,经酶切和核酸测序鉴定,得到了正确的重组质粒pET-BDNF,并在大肠杆菌中获得了表达.纯化后的蛋白经考马氏亮蓝染色呈单一条带;用抗BDNF的抗体进行western blot分析证明目的蛋白获得了表达.基因重组BDNF蛋白能够促进PC12细胞增殖.结论 本研究成功构建了表达基因重组人BDNF的原核表达载体,基因重组人BDNF蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化,所获得的基因重组蛋白具有较好的生物学活性.
作 者：马蕾蕾 苏丹 季爱民 MA Lei-lei SU Dan JI Ai-min 作者单位：510282,广州,南方医科大学珠江医院新药研发中心 刊 名：中华神经医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE 年，卷(期)：2006 5(11) 分类号：Q5 关键词：脑源性神经营养因子 大肠杆菌 蛋白表达 蛋白纯化 生物学活性篇5：hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleukin 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的'hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10.
作 者：王F东 孙自勇 陈俊勇 吴盛 智强 刘建宁 Wang Mindong Sun Ziyong Chen Junyong Wu Sheng Zhi Qiang Liu Jianning 作者单位：王F东,Wang Mindong(南京市公安局刑警支队,江苏,南京,210012)孙自勇,陈俊勇,吴盛,智强,刘建宁,Sun Ziyong,Chen Junyong,Wu Sheng,Zhi Qiang,Liu Jianning(南京大学分子医学研究所,江苏,南京,210093)
刊 名：南京师大学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 29(3) 分类号：Q78 关键词：人白细胞介素-10(hIL-10) 克隆 表达 大肠杆菌 生物学活性 夹心ELISA篇6：人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化
人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化
将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的'23%.包涵体经洗涤和溶解,在变性条件下利用Ni2+螯合柱纯化、尿素梯度复性后,得到纯度达98%以上的纯化蛋白.SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43 000,Western-blot分析表明,在相应分子量处有一特异性条带,说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1.
作 者：李桂英 邹德生 周立宏 曹玉华 LI Gui-ying ZOU De-sheng ZHOU Li-hong CAO Yu-hua 作者单位：吉林大学,分子酶学工程教育部重点实验室,长春,130021 刊 名：吉林大学学报（理学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 44(5) 分类号：Q786 关键词：人细胞周期蛋白D1 表达 包涵体 融合蛋白 蛋白质纯化 大肠杆菌【截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定】相关文章：
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