甘油脱水酶再激活酶的克隆表达及活性鉴定
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篇1：甘油脱水酶再激活酶的克隆表达及活性鉴定
甘油脱水酶再激活酶的克隆表达及活性鉴定
运用PCR技术从克雷伯氏菌的基因组中分别扩增得到了编码甘油脱水酶再激活酶α、β两个亚基的基因gdrA、gdrB.将gdrA、gdrB克隆至pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-gdrAB.经测序正确后,将gdrAB亚克隆至表达载体pET-28a(+)上构建表达质粒pET-28gdrAB.利用双抗生素筛选法,将pET-28gdrAB与连有甘油脱水酶基因的表达载体pET-32gldABC在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中共表达,鉴定了甘油脱水酶再激活酶的'活性.
作 者：李雯君 方柏山 洪燕 王晓霞 林锦霞 刘桂兰 LI Wen-Jun FANG Bai-Shan HONG Yan WANG Xiao-Xia LIN Jin-Xia LIU Gui-Lan 作者单位：工业生物技术福建省高等学校重点实验室(华侨大学),泉州,36 刊 名：生物工程学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 22(6) 分类号：Q786 关键词：甘油脱水酶 甘油脱水酶再激活酶 共表达 不相容双质粒 分子伴侣篇2：从甘油富集菌宏基因组中克隆甘油脱水酶基因
从甘油富集菌宏基因组中克隆甘油脱水酶基因
采用一种简便快速的方法从经甘油富集培养的.土样中提取出质量较好宏基因组DNA.然后以此DNA为模板,以扩增肺炎克雷伯氏菌、弗氏柠檬酸菌和丁酸梭菌甘油脱水酶基因的引物进行PCR,分别扩增出目的条带,并将其克隆至T载体中.进行测序分析显示,PCR扩增出来的片段与其引物相应的甘油脱水酶序列同源性分别达到99%,90%和99%.这表明克隆出来的这3个基因为相应的甘油脱水酶基因.
作 者：吴杰群 周文广 杨登峰 齐向辉 韦宇拓 黄日波 WU Jie-Qun ZHOU Wen-Guang YANG Deng-Feng QI Xiang-Hui WEI Yu-Tuo HUANG Ri-Bo 作者单位：吴杰群,周文广,齐向辉,韦宇拓,WU Jie-Qun,ZHOU Wen-Guang,QI Xiang-Hui,WEI Yu-Tuo(广西大学生命科学与技术学院,南宁,530005)杨登峰,YANG Deng-Feng(广西科学院,南宁,530022)
黄日波,HUANG Ri-Bo(广西大学生命科学与技术学院,南宁,530005;广西科学院,南宁,530022)
刊 名：微生物学通报 ISTIC PKU英文刊名：MICROBIOLOGY 年，卷(期)：2006 33(6) 分类号：Q781 关键词：宏基因组 甘油脱水酶 基因克隆篇3：家蚕羧酸酯酶基因克隆及差异表达
家蚕羧酸酯酶基因克隆及差异表达
家蚕浓核病毒 (Bombyx mori densonucleosis virus,BmDNV)是蚕业生产上危害比较严重的一类病毒.用完全抗浓核病中国镇江株(BmDNV-Z)的家蚕品系秋丰、感性品系华八及以华八为轮回亲本回交8代和自交8代构建的近等基因系BC8为材料,采用mRNA荧光差显技术首次分离克隆了家蚕羧酸酯酶(B. mori carboxylesterase,BmCarE)基因全长cDNA,并用实时荧光定量PCR检测了添毒后12 h、36 h、72 h BmCarE在感、抗BmDNV-Z家蚕品系中肠内的表达差异.结果表明: (1)添毒后12 h不同品系家蚕中肠BmCarE表达差异最大,抗性品系BC8和秋丰分别是感性品系华八的`17.714倍和3.602倍,三者彼此间的差异达到极显著水平;(2)同一品系添毒后12 h与添清水后12 h BmCarE表达也有较大差异, BC8添毒是BC8添清水的15.08倍,秋丰添毒是秋丰添清水的3.39倍, 差异达到极显著水平,而华八添毒和添清水的BmCarE表达量均低,二者差异不显著;(3)同一品系添毒后不同时间BmCarE表达也有较大差异, BC8和秋丰添毒后12 h BmCarE表达量最高,显著高于各自添毒后36 h和72 h表达水平,而添毒后36 h与72 h表达无显著差异;华八添毒后12 h、36 h和72 h,BmCarE表达无显著差异.上述结果提示羧酸酯酶基因可能与家蚕抗浓核病毒有一定关系.
作 者：高贵田 陈克平姚勤 王林玲 陈慧卿 GAO Gui-Tian CHEN Ke-Ping YAO Qin WANG Lin-Ling CHEN Hui-Qing 作者单位：高贵田,GAO Gui-Tian(江苏大学生命科学研究院,江苏镇江,21;陕西师范大学食品工程系,西安,710062)陈克平,姚勤,王林玲,陈慧卿,CHEN Ke-Ping,YAO Qin,WANG Lin-Ling,CHEN Hui-Qing(江苏大学生命科学研究院,江苏镇江,212013)
刊 名：昆虫学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ENTOMOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 49(6) 分类号：Q966 关键词：家蚕 羧酸酯酶基因 表达差异 近等基因系 RT-PCR篇4：温度影响酶活性因素实验流程的再设计
关于温度影响酶活性因素实验流程的再设计
酶活性的大小受多方面因素影响,其中温度是影响酶活性的重要因素之一,也是中专生化实验中验证影响酶活性因素的.主要定性实验之一.笔者根据多年的实验教学经验对实验流程进行再设计,同时通过进一步实验,验证出酶的另一性质,收到了良好的教学效果.
作 者：吴晨怡 作者单位：鞍山师范学院附属卫校,辽宁,鞍山,114001 刊 名：卫生职业教育 英文刊名：HEALTH VOCATIONAL EDUCATION 年，卷(期)： 27(7) 分类号：G424.31 关键词：温度 酶活性 实验流程篇5：人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定
人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定
目的 构建人His标记的γ干扰素诱导蛋白10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达、纯化,获得有活性的IP-10蛋白,为进一步研究其在炎症过程中的作用机制及寻找新的抗炎途径提供基础.方法 从人肺cDNA文库中PCR扩增无信号肽的`IP-10基因编码序列,构建重组载体pET-14b/IP-10;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株;经异丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,用镍离子亲和层析柱纯化融合蛋白,以THP-1细胞进行微室跨膜迁移(transwell)实验鉴定融合蛋白活性.结果 酶切、测序鉴定重组载体pET-14b/IP-10构建正确,并纯化得到高纯度的IP-10融合蛋白.而且该蛋白具有诱导单核细胞THP-1跨膜迁移活性.结论 成功构建了人IP-10融合蛋白表达载体,并纯化得到具有活性的IP-10融合蛋白,为进一步研究IP-10的功能提供了重要的实验材料.
作 者：邵紫韫 彭毅 SHAO Zi-yun PENG Yi 作者单位：邵紫韫,SHAO Zi-yun(广州军区武汉总医院医务部,武汉,430070)彭毅,PENG Yi(广州军区武汉总医院心血管内科)
刊 名：华南国防医学杂志 ISTIC英文刊名：MILITARY MEDICAL JOURNAL OF SOUTH CHINA 年，卷(期)： 22(4) 分类号：Q78 关键词：γ干扰素诱导蛋白10 融合蛋白 细胞迁移篇6：耐热果胶裂解酶基因pel9A的克隆和表达
耐热果胶裂解酶基因pel9A的克隆和表达
利用PCR技术从耐热梭状芽孢杆菌(Clostridium stercorarium)中扩增得到产耐热果胶裂解酶的'结构基因pel9A,并将其克隆于表达载体pET28a中,最后将此重组质粒转化到受体菌E.coli BL-21中进行表达.诱导条件为:37 ℃诱导5 h,IPTG浓度为0.8 mmol/L.重组菌经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表达的蛋白质的相对分子质量为130 000,与预期相对分子质量相符.细胞经超声破碎后,测得果胶酶的比酶活为15 U/mg粗蛋白.
作 者：甄东晓 王树英 严群 李华钟 ZHEN Dong-xiao WANG Shu-ying YAN Qun LI Hua-zhong 作者单位：甄东晓,严群,ZHEN Dong-xiao,YAN Qun(江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214036)王树英,WANG Shu-ying(江南大学,分析测试中心,江苏,无锡,214036)
李华钟,LI Hua-zhong(江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214036;江南大学,医学系,江苏,无锡,214036)
刊 名：食品与生物技术学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 25(3) 分类号：Q557 关键词：果胶裂解酶 耐热梭状芽孢杆菌 重组质粒 大肠杆菌BL-21 表达篇7：NDRG4基因的克隆、表达及抑瘤活性研究
NDRG4基因的克隆、表达及抑瘤活性研究
目的 克隆、表达抑癌基因NDRG4,纯化后考察其抑瘤活性.方法 将NDRG4基因克隆进PQE30/M15表达载体,诱导表达后亲和色谱纯化,对纯化表达产物进行一系列检测,考察其抑瘤作用.结果 表达产物NDRG4蛋白相对分子质量为38 856,表达量为19.58%,纯度为92%,等电点为6.2,流式细胞术证实该蛋白质对HHCC和7901肿瘤细胞均阻滞在G1期,细胞实验和裸鼠致瘤抑制实验证实该蛋白质对肿瘤细胞的生长和肿瘤的`发生发育有较强抑制作用.结论 构建了NDRG4的PQE30/M15表达载体并取得高表达,表达蛋白质有较强抑瘤活性,为基因功能研究奠定了基础.
作 者：陈杰 张翊 饶春明 吴梧桐 王军志 CHEN Jie ZHANG Yi RAO Chun-ming WU Wu-tong WANG Jun-zhi 作者单位：陈杰,CHEN Jie(河南省药品检验所,河南,郑州,450003)张翊,饶春明,王军志,ZHANG Yi,RAO Chun-ming,WANG Jun-zhi(中国药品生物制品检定所,北京,100050)
吴梧桐,WU Wu-tong(中国药科大学,江苏,南京,210009)
刊 名：中国生化药物杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS 年，卷(期)：2006 27(3) 分类号：Q786 R965 关键词：NDRG4 克隆 表达 纯化 肿瘤抑制作用【甘油脱水酶再激活酶的克隆表达及活性鉴定】相关文章：
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