巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略
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篇1：巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略
巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略
毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的'其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分秘、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达.该文综述了基自身的优点,表达载体和宿主菌的特点,以及高水平表达外源基因的策略.
作 者：胡世界 罗素兰 张吉贞 长孙东亭 HU Shi-jie LUO Su-lan ZHANG Ji-zhen ZHANGSUN Dong-ting 作者单位：热带生物资源教育部重点实验室,海南大学海洋学院,海南大学生物技术实验中心,海南,海口,570228 刊 名：生物技术 PKU英文刊名：BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 17(6) 分类号：Q786 关键词：巴斯德毕赤酵母 酵母表达系统 高水平表达 表达策略篇2：毕赤酵母表达HWTX-Ⅰ的不均一性分析
毕赤酵母表达HWTX-Ⅰ的不均一性分析
为了寻找毕赤酵母表达虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)时产生不均一性表达产物的原因,应用阳离子交换层析、反相HPLC、Tricine SDS-PAGE电泳、质谱等技术,对基因工程菌Pichia pastoris GS115/HWTX-Ⅰ表达的.不均一产物进行了分离、纯化和鉴定,并对不均一产物的N端和C端进行测序,结果表明:表达产物的不均一性主要体现在重组HWTX-Ⅰ的N端信号肽加工的不完全以及C末端的内部降解.生物学活性分析表明该不均一产物的活性仅为天然HWTX-Ⅰ活性的30%.同时,对如何避免不均一性表达产物的产生提出了相应的对策.
作 者：聂东宋 周延凯 曹佐英 刘宇 NIE Dong-Song ZHOU Yan-Kai CAO Zuo-Ying LIU Yu 作者单位：湖南理工学院化学化工系,岳阳,414000 刊 名：生物工程学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q786 关键词：毕赤酵母 重组虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ 不均一性 基因工程篇3：人SM22α在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化及抗体制备
人SM22α在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化及抗体制备
目的:用酵母表达重组人平滑肌22α(SM22α)蛋白,制备兔抗人SM22α多克隆抗体.方法:利用PCR从pGEM3z-SM22α质粒扩增得到人SM22α基因编码区,重组至pPIC9构建酵母表达载体,转染巴斯德毕赤酵母,进行分泌型表达.表达产物经分步盐析和CM-纤维素柱层析纯化后,免疫家兔,制备兔抗人SM22α多克隆抗体.结果:所构建的pPIC9-SM22α酵母表达载体转染酵母感受态细胞后,外源性SM22α可整合至酵母染色体中,经甲醇诱导84 h,可实现SM22α的高效表达与分泌.用70%硫酸铵处理上清液,收集沉淀进行离子交换层析纯化后,经变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见一分子量为22 kD的单一区带.用该纯化产物免疫家兔制备的`兔抗人SM22α抗血清可用于检测人或大鼠血管壁中SM22α的表达水平.结论:重组人SM22α可在巴斯德毕赤酵母中进行高效表达与分泌,纯化蛋白可用于抗体制备,为研究SM22α功能提供了检测工具.
作 者：温进坤 聂磊 李静宜 程云会 韩梅 WEN Jin-kun NIE Lei LI Jing-yi CHENG Yun-hui HAN Mei 作者单位：河北医科大学基础医学研究所,河北省医学生物技术重点实验室,河北,石家庄,050017 刊 名：中国应用生理学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF APPLIED PHYSIOLOGY 年，卷(期)：2006 22(3) 分类号：Q78 关键词：平滑肌22α 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 抗血清篇4：毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白
毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白
将能够成功表达重组人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德毕赤酵母培养至诱导期后,流加亚硒酸钠,同时设空白对照发酵液(不加入亚硒酸钠),通过对比相同菌株在两组培养基中表达的rHSA的'含硒量,判断硒能否以硒代氨基酸的形式存在于重组蛋白质中.发酵液经热处理、超滤、离子交换和丙酮沉淀等步骤后,进行Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳、X射线能量色散谱(EDX)和原子吸收分析.结果表明,加硒发酵液样品中硒元素的质量分数比对照多23.2%,硒与蛋白质的质量比为0.0069,高于对照发酵液近35倍,初步证明无机硒可以被毕赤酵母同化,转化为硒代氨基酸,并形成硒代重组蛋白质.
作 者：陈思 任锐 陈劲春 CHEN Si REN Rui CHEN Jin-chun 作者单位：北京化工大学,生命科学与技术学院,北京,100029 刊 名：北京化工大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF BEIJING UNIVERSITY OF CHEMICAL TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 33(5) 分类号：Q94 关键词：亚硒酸钠 重组人血清白蛋白 毕赤酵母篇5：草鱼生长激素基因在毕赤酵母中的表达
草鱼生长激素基因在毕赤酵母中的表达
将草鱼生长激素基因(cGH)的cDNA亚克隆到酵母表达载体pPIC9K中, 经电击转化导入毕赤巴斯德酵母GS115菌株,获得转化子.菌落PCR技术筛选证实cGH已经整合到了酵母染色体上.对重组酵母进行诱导表达, SDS-PAGE和Western印迹分析,结果表明cGH在毕赤巴斯德酵母GS115菌株中获得了高效表达.
作 者：孟亚鹏 徐敏 代焕梅 丁秀琼 张海英 殷雪 刘世贵 龙章富 MENG Ya-peng XU Min DAI Huan-mei DING Xiu-qiong ZHANG Hai-ying YIN Xue LIU Shi-gui LONG Zhang-fu 作者单位：孟亚鹏,徐敏,代焕梅,丁秀琼,张海英,殷雪,MENG Ya-peng,XU Min,DAI Huan-mei,DING Xiu-qiong,ZHANG Hai-ying,YIN Xue(四川大学生命科学学院,成都,610064)刘世贵,龙章富,LIU Shi-gui,LONG Zhang-fu(四川大学生命科学学院,成都,610064;成都川大创新生物技术研究所)
刊 名：四川动物 ISTIC PKU英文刊名：SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY 年，卷(期)：2006 25(1) 分类号：Q959.4 TQ926 关键词：草鱼 生长激素基因 pPIC9K表达载体 毕赤酵母 高效表达篇6：棉铃虫组织蛋白酶B酶原在毕赤酵母中的表达
棉铃虫组织蛋白酶B酶原在毕赤酵母中的表达
棉铃虫组织蛋白酶B(Helicoverpa armigera Cathepsin B,HCB)属于半胱氨酸蛋白酶类,参与胚胎发育中卵黄蛋白水解供给胚胎发育的氨基酸.将HCB基因克隆到pPIC9K载体并转化毕赤酵母KM71菌株,经甲醇诱导,HCB表达并分泌到培养上清中.表达产物经SDS-PAGE测定分子量为38 kDa,与HCB基因编码的蛋白质分子量一致.用HCB的`特异性抗体检测表明重组表达产物为棉铃虫组织蛋白酶B,原位水解实验显示重组表达的蛋白酶具有蛋白水解活性,表明在毕赤酵母中表达了有活性的棉铃虫组织蛋白酶B,可用于组织蛋白酶B酶原活化机理研究及开发新蛋白酶产品.
作 者：董杜鹃 扈进冬 张新昌 李子劲 王金星 赵小凡 DONG Du-juan HU Jin-dong ZHANG Xin-chang LI Zi-jin WANG Jin-xing ZHAO Xiao-fan 作者单位：山东大学生命科学学院,济南,250100 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 26(2) 分类号：Q786 关键词：棉铃虫组织蛋白酶B 毕赤酵母 重组表达篇7：人α-防御素基因克隆及其毕赤酵母表达的研究
人α-防御素基因克隆及其毕赤酵母表达的研究
为探讨人α-防御素(HNP2)酵母表达,根据HNP2氨基酸序列和巴斯德毕赤酵母密码偏爱性,设计HNP2基因序列片段,构建pGAPZαA-HNP2酵母表达载体,转化E.coliJM109,扩增重组子,经限制性核酸内切酶BlnI线性化,转毕赤酵母.PCR扩增挑选阳性转化子,SDS-PAGE分析酵母表达,利用阳离子交换树脂纯化HNP2,开展抗菌试验.结果显示转入巴斯德毕赤酵母HNP2基因得到表达,表达的HNP2具有显著的`抗菌作用.
作 者：李再新 罗惠波 周键 左勇 刘达玉 LI Zai-xin LUO Hui-bo ZHOU Jian ZUO Yong LIU Da-yu 作者单位：四川理工学院生物工程系,四川,自贡,643000 刊 名：分子科学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCE 年，卷(期)：2006 22(4) 分类号：Q81 关键词：人α-防御素 克隆 酵母表达 抗菌活性篇8：不同控制模式对毕赤酵母表达IL-2-HSA的比较研究
不同控制模式对毕赤酵母表达IL-2-HSA的比较研究
以溶氧(DO)和甲醇浓度作为控制指标,分别考察了诱导表达阶段DO和甲醇浓度对毕赤酵母高密度发酵表达白介素-2-白蛋白融合蛋白(IL-2-HSA)的.影响.通过实验比较得出:诱导阶段控制DO对IL-2-HSA表达影响不明显,而甲醇浓度对IL-2-HSA影响很大.高甲醇浓度(15～25g/L)有利于IL-2-HSA的表达,发酵结束时的表达量约是低甲醇浓度(5～8g/L)诱导下的2倍.此外,在诱导阶段,通过限制性添加甘油可以有效提高菌体的呼吸活性,促进菌体生长.
作 者：堵益平GAO Min-jie 金虎 SHI Zhong-ping DU Yi-ping GAO Min-jie JIN Hu SHI Zhong-ping 作者单位：江南大学生物工程学院,工业微生物教育部重点实验室,无锡,214122 刊 名：生物学杂志 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF BIOLOGY 年，卷(期)： 25(4) 分类号：Q819 关键词：白介素-2-白蛋白融合蛋白 毕赤酵母 溶氧 甲醇浓度篇9：乙酰肝素酶大亚基在毕赤酵母中的表达
乙酰肝素酶大亚基在毕赤酵母中的表达
目的 构建乙酰肝素酶(HPA)大亚基片段真核表达质粒,并在毕赤酵母中表达重组蛋白.方法 根据GenBank中登录的HPA大亚基基因序列设计引物,PCR方法扩增肝素酶基因,构建毕赤酵母真核表达质粒pPICZαA-HPA.电击穿孔法转化感受态毕赤酵母SDM1168,斑点免疫印迹法筛选重组菌株,PCR法鉴定阳性克隆.甲醇诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定表达产物.结果 构建的重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;斑点免疫印迹法筛选出的9个单菌落经PCR扩增,均可见1 161 bp的目的`基因条带;表达产物经Western blot分析,具有良好的反应原性,表达量约为μg/L.结论 已成功构建了HPA大亚基片段真核表达质粒pPICZαA-HPA,并在毕赤酵母SDM1168中分泌表达了HPA大亚基.
作 者：季颖 邱伟成 高新 付洁 王清清 宋海峰 作者单位：季颖,高新,付洁,王清清,宋海峰(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850)邱伟成(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850;首都师范大学生命科学学院,北京,100048)
刊 名：中国生物制品学杂志 ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS 年，卷(期)： 23(3) 分类号：Q786 关键词：乙酰肝素酶 大亚基 毕赤酵母 表达 Heparanase (HPA) C-terminal subunit Pichia pastoris Expression篇10：白蛋白融合α-2b干扰素在毕赤酵母中的表达
白蛋白融合α-2b干扰素在毕赤酵母中的表达
α-2b干扰素的重组表达质粒pPIC9K-HSA-IFNα-2b经限制性内切酶SalI酶切线性化后电转化巴斯德毕赤酵母菌(P.Pastoris)SMD1168,将阳性转化子进行PCR鉴定和Mut表型鉴定并用甲醇诱导表达,Western-Blot结果表明白蛋白融合IFNα蛋白与IFNα抗体具有结合能力,Wish细胞-VSV病毒系统鉴定表达蛋白具有抗病毒生物活性.在摇瓶培养条件下,甲醇在0.5%～4.0%的范围,随着浓度的升高蛋白表达量也升高,在其他因素固定时,菌体起始OD值在5～80的范围内,随着OD值的'升高表达量反而下降.成功表达出具有高生物学活性的白蛋白融合干扰素蛋白(HSA-IFNα-2b),为进一步应用打下基础.
作 者：张伍魁 范清林 邹文艺 仲皙 宋礼华 ZHANG Wu-kui FAN Qing-lin ZOU Wen-yi ZHONG Xi SONG Li-hua 作者单位：张伍魁,ZHANG Wu-kui(安徽医科大学基础医学院,合肥,230032)范清林,邹文艺,FAN Qing-lin,ZOU Wen-yi(安徽安科生物工程股份有限公司,合肥,230088)
仲皙,ZHONG Xi(中国药科大学,南京,210009)
宋礼华,SONG Li-hua(安徽医科大学基础医学院,合肥,230032;安徽安科生物工程股份有限公司,合肥,230088)
刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2005 25(12) 分类号：Q81 关键词：白蛋白融合α-2b干扰素 巴斯德毕赤酵母菌 Wish细胞-VSV病毒系统【巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略】相关文章：
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