拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定
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篇1：拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定
拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定
以生物素标记的钙调素为探针,从拟南芥(Arabidopsis thaliana)λZAPⅡ cDNA表达文库中分离到9个阳性克隆.融合蛋白经CaM-gel overlay分析,其中Y1编码的融合蛋白在1 mmol/L Ca2+存在下与胶体金标记的钙调素有明显结合.序列测定结果显示其外源片段全长为726 bp,含有一个476 bp的开放阅读框.GenBank数据库搜索及同源性分析结果表明该序列为拟南芥1号染色体基因组5 661～7 013序列,编码一未知蛋白,但与真核生物翻译起始因子5A(eIF-5A)具87%的同源性,并具相似的分子量、等电点和相同的保守序列.与eIF-5A的结构特征比较,可初步确定Y1编码的.蛋白为真核生物翻译起始因子5A家族中的新成员.即拟南芥1号染色体5 661～7 013序列为一尚未报道的翻译起始因子基因.蛋白质二级结构预测其C-端122～135氨基酸残基处有一双亲α-螺旋结构,这一结构与大多数钙调素结合蛋白中的钙调素结合位点的结构特征一致.该序列已提交NCBI BankIt数据库,登录号为AF492850.
作 者：詹红利 李翠风 祁倩 李国亮 凌启阆 Zhan Hongli Li Cuifeng Qi Qian Li Guoliang Ling Qilang 作者单位：南开大学,生物化学与分子生物学系,天津,300071 刊 名：南开大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS NANKAIENSIS 年，卷(期)： 39(3) 分类号：Q75 关键词：钙调素结构蛋白 真核生物翻译起始因子5A(eIF-5A) 表达文库筛选篇2：人SBK1 cDNA的克隆及其相互作用蛋白的筛选
人SBK1 cDNA的克隆及其相互作用蛋白的筛选
首次克隆到人的SBK1(homo sapiens SH3-binding domain kinase 1,SBK1)的cDNA序列,并通过生物信息学的手段,电子克隆到人SBK1的基因组DNA序列.人的SBK1是鼠SBK1的直系同源物,两者基因组DNA结构相似,均含有4个外显子.人的sbk1基因ORF长1 275 bp,编码424个氨基酸,而鼠的ORF长1 254 bp,编码417个氨基酸.两者编码区的核苷酸序列同源性达87.7%,而氨基酸序列同源性达95.7%,在羧基端均有一个PV富集区,推测其能与含有SH3结构域的`蛋白质结合.将RT-PCR所获得的长度为1 610 bp的sbk1 cDNA序列搜索EST数据库,进行电子延伸,最终获得了约5kb的人sbk1全长mRNA序列,它与鼠的sbk1全长mRNA大小一致;通过比较基因组学发现UniGene族Hs.97837实际上代表了sbk1基因UniGene族Hs.460471的3'UTR区域,而不是代表了一个新的UniGene族.采用酵母双杂交技术,以SBK1为“诱饵”,获得了与之相互结合的蛋白表皮生长因子受体EGFR和核孤儿受体蛋白NR4A1,它们之间的具体功能关系有待进一步研究.
作 者：王平章 王欣 王峰 吴俊 WANG Ping-Zhang WANG Xin WANG Feng WU Jun 作者单位：王平章,王峰,WANG Ping-Zhang,WANG Feng(国家人类基因组北方研究中心,北京,100176)王欣,WANG Xin(中国医学科学院基础医学研究所,北京,100005)
吴俊,WU Jun(国家人类基因组北方研究中心,北京,100176;上海睿星基因技术有限公司,上海,03)
刊 名：中国生物化学与分子生物学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)：2006 22(4) 分类号：Q71 关键词：SBK1 克隆 酵母双杂交 相互作用篇3：晚期氧化蛋白产物的分离纯化和鉴定
晚期氧化蛋白产物的分离纯化和鉴定
目的分离纯化以人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)为原料生成的晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP),即AOPP-HSA,并对其进行鉴定,以寻求一种制备高纯度且具生物活性的`AOPP-HSA的方法.方法采用HSA-HOCl孵育法体外制备AOPP-HSA粗纯品,经凝胶层析和离子交换高压液相层析(high performance liquid chromatography,HPLC)两步层析分离纯化其中的AOPP-HSA,并经紫外和荧光光谱、SDS-PAGE、单核细胞TNF-α分泌实验鉴定其结构特征和生物学活性.结果分离的蛋白质纯度达99.4%,分子质量为700×103,是含有双酪氨酸的蛋白交联聚合物,能够显著刺激单核细胞TNF-α的分泌.结论采用上述两步层析方法能够由粗纯品中成功分离出高纯度并具生物活性的AOPP-HSA,为AOPP的进一步研究奠定了基础.
作 者：孙岩 吴雄飞 金锡御 SUN Yan WU Xiong-fei JIN Xi-yu 作者单位：第三军医大学西南医院肾科,重庆,400038 刊 名：第三军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)： 28(10) 分类号：Q503 Q51 Q591.2 关键词：晚期氧化蛋白产物 尿毒症毒素 色谱法 凝胶 离子交换 单核细胞篇4：重组融合蛋白GX1-rmhTNFα的克隆、表达及鉴定
重组融合蛋白GX1-rmhTNFα的克隆、表达及鉴定
目的:构建胃癌新生血管导向性肽GX1与新型人肿瘤坏死因子(GX1-rmhTNF)基因的'原核表达载体,表达GX1-rmhTNF蛋白.方法:利用基因工程方法将胃癌血管特异性结合肽融合在新型人肿瘤坏死因子α的氨基末端,构建GX1-rmhTNF原核表达载体,在大肠杆菌进行表达.对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析.结果:成功构建了GX1-rmhTNF重组融合表达质粒,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在相对分子质量(Mr)约18 000处出现了1条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TNFα单克隆抗体特异性的结合能力.结论:成功构建了GX1-rmhT-NF基因的原核表达载体并在原核细胞中表达了该产物,为下一步GX1-rmhTNF的纯化奠定了基础.
作 者：曹珊珊 吴开春 颜真 万一 韩宇 赵丽娜 樊代明 CAO Shan-shan WU Kai-chun YAN Zhen WAN Yi HAN Yu ZHAO Li-na FAN Dai-ming 作者单位：第四军医大学西京医院消化内科,肿瘤生物学国家重点实验室,陕西,西安,710032 刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)：2006 22(3) 分类号：Q78 关键词：噬菌体肽段CGNSNPKSC/GX1 GX1-rmhTNFα 重组融合蛋白/表达 温度诱导篇5：烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达
烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达
利用RT-PCR技术从烟实夜蛾Helicoverpa assulta(Hass)雄虫触角中扩增得到了信息素结合蛋白3(Hass PBP3).克隆和测序结果表明,该基因核苷酸序列全长495bp,编码164个氨基酸残基,预测分子量18.5kD.并预测N-末端疏水区包含由22个氨基酸组成的信号肽.因此,成熟蛋白应包括142个氨基酸,预测分子量为16.1 kD,等电点为5.44.经氨基酸序列同源性分析发现,此序列与已知昆虫PBP3有较高的同源性,而且具有气味结合蛋白的典型特征.将该基因重组到表达载体pGEX-4T-2中进行原核表达.经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western印迹检测,结果表明烟实夜蛾PBP3基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约42kD的.外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符.
作 者：刘晓光 安世恒 罗梅浩 郭线茹 原国辉 LIU Xiao-Guang AN Shi-Heng LUO Mei-Hao GUO Xian-Ru YUAN Guo-Hui 作者单位：河南农业大学植物保护学院,郑州,450002 刊 名：昆虫学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ENTOMOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 49(5) 分类号：Q966 关键词：烟实夜蛾 信息素结合蛋白 基因克隆 原核表达篇6：微管相关蛋白2微管结合区基因的克隆与表达
微管相关蛋白2微管结合区基因的克隆与表达
为了研究微管相关蛋白2(MAP2)在促进微管形成、维持微管稳定及促进轴突和树突细胞器转运等方面的作用,试验克隆了MAP2微管结合区基因,构建了原核表达载体pET32a-MAP2并对其进行诱导表达,利用亲和层析法对表达产物进行纯化,研究了表达产物与微管蛋白之间的作用.结果表明,融合表达的'人MAP2微管结合区蛋白约43 ku,可与天然的微管蛋白发生分子间的结合作用,为MAP2生理功能的研究奠定了基础.
作 者：郭燕 张彦明 高晨 韩俊 陈建明 石琦 高永军 周伟 董小平GUO Yan ZHANG Yan-ming GAO Chen HAN Jun CHEN Jian-ming SHI Qi GAO Yong-jun ZHOU Wei DONG Xiao-ping 作者单位：郭燕,张彦明,GUO Yan,ZHANG Yan-ming(西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100)高晨,韩俊,陈建明,石琦,高永军,周伟,董小平,GAO Chen,HAN Jun,CHEN Jian-ming,SHI Qi,GAO Yong-jun,ZHOU Wei,DONG Xiao-ping(中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052)
刊 名：西北农林科技大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY (NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 34(8) 分类号：Q785 Q786 关键词：MAP2 表达纯化 微管蛋白篇7：外源钙调素与拟南芥悬浮培养细胞结合位点的观测及其胞外效应
外源钙调素与拟南芥悬浮培养细胞结合位点的观测及其胞外效应
以拟南芥悬浮培养细胞为实验体系,借助外源荧光及同位素标记钙调素,研究结果表明外源钙调素不能被主动内吞入细胞内,而是主要以完整分子形式结合在细胞外表面;外源纯化钙调素可促进正向型质膜囊泡中的.鸟苷酸三磷酸水解酶活性升高,也可引起拟南芥悬浮细胞质游离钙离子浓度的特异升高,表明外源钙调素可能通过细胞表面位点跨膜信号转换为细胞内信号,从而调节生物学活性.
作 者：崔素娟 常芳 高英杰 王媛媛 孙大业 CUI Su-Juan CHANG Fang GAO Ying-Jie WANG Yuan-Yuan SUN Da-Ye 作者单位：河北师范大学分子细胞生物学实验室,石家庄,050016 刊 名：植物生理与分子生物学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF PLANT PHYSIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 32(4) 分类号：Q94 关键词：细胞外钙调素 拟南芥 悬浮细胞 细胞质钙信号 GTP酶活性篇8：镰形扇头蜱微管蛋白基因的分离和cDNA序列分析
镰形扇头蜱微管蛋白基因的分离和cDNA序列分析
分离和鉴定镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides,Rh)新基因,为防治镰形扇头蜱提供药物靶标或候选疫苗.从镰形扇头蜱唾液腺抑制消减杂交文库中筛选了一条编码微管蛋白的基因片段,通过3'-RACE的`方法得到全长序列;采用生物信息学技术等对该cDNA进行分析.获得1个镰形扇头蜱新基因 - 微管蛋白基因(RhM 1),全长680 bp,开放阅读框(ORF)全长537 bp,编码179个氨基酸.编码蛋白的理论分子量为20 KDa,等电点为4.71;抗原表位可能位于cDNA序列N末端第18～25氨基酸处.
作 者：石磊 李庄 周勇志 周金林 作者单位：石磊(中国农业科学院上海兽医研究所,农业部寄生虫学重点开放性实验室,上海,200232;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,832500)李庄,周勇志,周金林(中国农业科学院上海兽医研究所,农业部寄生虫学重点开放性实验室,上海,200232)
刊 名：上海畜牧兽医通讯 英文刊名：SHANGHAI JOURNAL OF ANIMAL HUSBANDRY AND VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)：2009 “”(3) 分类号：S8 关键词：镰形扇头蜱 微管蛋白 3'-RACE【拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定】相关文章：
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