高效植物表达载体构建
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篇1:烟草花叶病毒siRNA设计及其植物表达载体构建
烟草花叶病毒siRNA设计及其植物表达载体构建
RNA干扰技术已广泛应用于沉默基因表达的研究.本文分析烟草花叶病毒(TMV)基因序列,选择设计编码小分子发卡结构RNA(hpRNA)的.cDNA;并根据农杆菌双元载体质粒p2355多克隆位点区限制性酶切位点,两端分别加入XbaI和BamHI酶切位点;分别合成单链DNA复性后插入到p2355上,经PCR、测序验证,表明已成功构建了具有潜在表达烟草花叶病毒siRNA的植物表达载体.图3表1参26
作 者:马欣荣 谈心 刘华玲 张义正 MA Xinrong TAN Xin LIU Hualing ZHANG Yizheng 作者单位:马欣荣,MA Xinrong(四川大学生命科学学院,成都,610064;中国科学院成都生物研究所,成都,610041)谈心,刘华玲,TAN Xin,LIU Hualing(中国科学院成都生物研究所,成都,610041)
张义正,ZHANG Yizheng(四川大学生命科学学院,成都,610064)
刊 名:应用与环境生物学报 ISTIC PKU英文刊名:CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY 年,卷(期): 12(2) 分类号:Q78 S435.72 关键词:RNA干扰(RNAi) 发卡RNA(hpRNA) 小分子干扰RNA(siRNA) 烟草花叶病毒(TMV) 植物表达载体 RNA interference (RNAi) hairpin RNA (hpRNA) short interfering RNAs (siRNAs) tobacco mosaic virus (TMV) plant expression vector篇2:葡萄糖氧化酶基因植物表达载体的构建
葡萄糖氧化酶基因植物表达载体的构建
为进一步开展转基因研究创造条件,用限制性内切酶将葡萄糖氧化酶(GOD)基因从pMD/GO载体上切下,定向连接到植物表达载体pROKⅡ的.CaMV35S启动子下游和NOS终止子上游,成功地构建了GOD基因植物表达载体pROK/GO.利用冻融法将此表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中,提取转化质粒,经PCR和酶切鉴定表明,GOD基因植物表达双元载体构建成功.
作 者:孙瑞芬 安玉麟 张鹤龄 兰海英 王静 程继东 刘力萍 SUN Rui-fen AN Yu-lin ZHANG He-ling LAN Hai-ying WANG Jing CHENG Ji-dong LIU Li-ping 作者单位:孙瑞芬,安玉麟,兰海英,刘力萍,SUN Rui-fen,AN Yu-lin,LAN Hai-ying,LIU Li-ping(内蒙古农牧业科学院生物技术中心,内蒙古,呼和浩特,010031)张鹤龄,ZHANG He-ling(内蒙古大学,生命科学学院,内蒙古,呼和浩特,010021)
王静,程继东,WANG Jing,CHENG Ji-dong(内蒙古农业大学,农学院,内蒙古,呼和浩特,010019)
刊 名:华北农学报 ISTIC PKU英文刊名:ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA 年,卷(期):2006 21(6) 分类号:Q782 关键词:葡萄糖氧化酶基因 植物表达载体篇3:RS基因的植物表达载体和酵母表达载体构建
RS基因的植物表达载体和酵母表达载体构建
白藜芦醇合酶(RS)是Res生物合成的`关键酶之一,它催化1分子4-香豆酰辅酶A和3分子丙二酰辅酶A反应合成Res.以花生中克隆的RS基因为基础,成功构建了RS基因的以Ubi为启动子的单子叶植物表达栽体pBIL-RS,为以后的基因工程遗传转化果蔗和其他单子叶植物改良其品质提供条件.同时构建了酵母表达载体pVT102U-RS,为下一步研究真核表达蛋白的生物活性提供条件,并为利用酵母生产Res提供了可能.
作 者:方珊茹 阙友雄 林剑伟 陈如凯 Fang Shanru Que Youxiong Lin Jianwei Chen Rukai 作者单位:方珊茹,Fang Shanru(福建省农业科学研究院水稻研究所,福州,350019)阙友雄,林剑伟,陈如凯,Que Youxiong,Lin Jianwei,Chen Rukai(福建农林大学农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室,福州,350002)
刊 名:生物技术通报 PKU英文刊名:BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年,卷(期): “”(3) 分类号:Q94 关键词:白藜芦醇合酶 酵母 表达载体 基因工程篇4:pSITITIN载体的构建及表达
pSITITIN载体的构建及表达
目的构建能阻断Wistar大鼠肌联蛋白表达的siRNA载体,为研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌细胞分化的过程中肌小节结构蛋白之间的相互关系打下基础.方法针对Wistar大鼠TITIN N2B区设计并构建重组质粒pSITITIN,针对人β-ACTIN设计并构建重组质粒pSIACTIN,利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养1周的新生大鼠心肌细胞和经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导后2周的`MSCs中,免疫荧光检测肌联蛋白的表达.结果重组质粒pSITITIN转染入正常心肌细胞和经5-aza处理后的MSCs后,肌联蛋白的表达均减弱(P<0.01);而转染pSIACTIN后不影响肌联蛋白的表达.结论 pSITITIN具有确切阻断肌联蛋白表达的效果.
作 者:张小飞 陈沅 田杰 ZHANG Xiao-fei CHEN Yuan TIAN Jie 作者单位:重庆医科大学儿童医院心血管内科,重庆,400014 刊 名:第三军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名:ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年,卷(期): 28(7) 分类号:Q782 R394-33 R394.2 关键词:骨髓间充质干细胞 RNA干扰 肌联蛋白篇5:半胱氨酸合成酶基因CPCSaseA植物表达载体的构建
半胱氨酸合成酶基因CPCSaseA植物表达载体的构建
半胱氨酸合成酶是植物硫代谢过程中催化O-乙酰丝氨酸和硫化氢合成半胱氨酸的`关键酶.用全长cDNA文库EST随机测序的方法获得了蜡梅的半胱氨酸合成酶胞质异形体基因,构建了全长正义植物表达载体pBI121-CPOASTL.
作 者:向白菊 林俊 眭顺照 皮伟 闫明旭 蒋安 作者单位:向白菊,蒋安(重庆市畜牧科学院,重庆荣昌,402460)林俊(重庆市第一农业学校,重庆,401329)
眭顺照,皮伟,闫明旭(西南大学园艺园林学院,重庆北碚,400716)
刊 名:安徽农学通报 英文刊名:ANHUI AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN 年,卷(期): 15(13) 分类号:Q559 关键词:半胱氨酸合成酶 CPCSaseA基因 植物表达载体篇6:一种通用高效的复杂载体构建的新方法
一种通用高效的复杂载体构建的新方法
文章报道了一种简便、通用、高效的复杂载体构建方法.此法是在PCR引物设计时,在目的片段5′端加上随机设计的接头,利用PCR克隆目的片段,再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性处理PCR克隆目的片段,产生多个首尾相匹配的黏性末端,进行多片段定向连接、转化、重组子鉴定.以7片段拼接的水稻单交换质体定点整合表达载体pRSMGA的`构建为例,应用上述方法构建只需做两次连接、转化,且其重组、转化效率高.数10次实验证明:这是一种简便、通用、高效的复杂构建载体的方法,该法至今尚未见报道.
作 者:陆云华 马立新 蒋思婧 LU Yun-Hua MA Li-Xin JIANG Si-Jing 作者单位:陆云华,LU Yun-Hua(湖北大学生命科学院分子微生物与基因工程实验室,武汉,430062;宜春学院生物工程系,江西,宜春,336000)马立新,蒋思婧,MA Li-Xin,JIANG Si-Jing(湖北大学生命科学院分子微生物与基因工程实验室,武汉,430062)
刊 名:遗传 ISTIC PKU英文刊名:HEREDITAS(BEIJING) 年,卷(期): 28(2) 分类号:Q78 关键词:复杂载体构建 新方法 T4 DNA聚合酶 水稻篇7:小麦TaLRK基因高效表达载体的构建及遗传转化
小麦TaLRK基因高效表达载体的构建及遗传转化
从抗白粉病小麦(Triticum aestivum L)品系99/2439中分离到1个类受体蛋白激酶基因TaLRK.为了研究TaLRK基因对小麦白粉病菌[Blumeria graminis (DC)E O Speer fsp tritici Em Marchal]的抗性作用,以单子叶植物高效表达载体pAHC25为基础载体,将TaLRK基因插入到玉米泛素高效启动子Ubi1的下游,构建成pAH-TaLRK(+)植物高效表达载体.利用花粉管通道技术,以高产小麦新品种周麦18为受体进行了遗传转化.T0代植株经PPT抗性鉴定、PCR扩增检测,获得了19个转基因植株,为研究小麦TaLRK基因的'功能奠定了基础.
作 者:洪德峰 牛吉山 章建新 张丽娜 王兵峰 HONG De-feng NIU Ji-shan ZHANG Jian-xin ZHANG Lina WANG Bing-feng 作者单位:洪德峰,章建新,HONG De-feng,ZHANG Jian-xin(新疆农业大学,新疆,乌鲁木齐,830052)牛吉山,张丽娜,王兵峰,NIU Ji-shan,ZHANG Lina,WANG Bing-feng(河南农业大学国家小麦工程技术研究中心,河南,郑州,450002)
刊 名:河南农业科学 ISTIC PKU英文刊名:JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES 年,卷(期):2006 “”(6) 分类号:S512.1 关键词:小麦 TaLRK基因 表达载体 遗传转化篇8:CryIA(c)和gna融合基因植物表达载体的构建
CryIA(c)和gna融合基因植物表达载体的构建
采用重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR),通过连接多肽FMDV2A序列将CryIA (c)和gna基因相融合,得到CryIA (c)-2A-gna抗虫融合基因.并进一步将玉米UBI启动子和融合基因(CryIA (c)-2A-gna)分别连接到植物表达载体pCAMBIA3300上,构建成由玉米UBI启动子驱动抗虫融合基因的植物表达载体pNUBG.经过限制性酶切分析鉴定,结果表明,含有融合基因的植物表达载体构建成功.
作 者:冯翠莲 张树珍 作者单位:冯翠莲(中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海口571101;海南大学农学院,海南儋州,571737)张树珍(中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海口,571101)
刊 名:热带作物学报 ISTIC英文刊名:CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS 年,卷(期):2010 31(2) 分类号:Q78 关键词:重叠延伸PCR FMDV2A 融合基因 表达载体 splicing by overlap extension PCR FMDV2A fusion gene expression vector【高效植物表达载体构建】相关文章:
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